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溴化氫瓊脂糖凝膠
簡(jiǎn)要描述：CNBr activated Sepharose 4B溴化氫活化 瓊脂糖凝膠 4B應用：親和層析填料包裝：15克
產(chǎn)品型號： 09-250
所屬分類(lèi)：溴化氫瓊脂糖凝膠
更新時(shí)間：2023-12-15
廠(chǎng)商性質(zhì)：生產(chǎn)廠(chǎng)家
為確保產(chǎn)品的性能和無(wú)憂(yōu)的操作，使用前請仔細閱讀本手冊，有任何疑問(wèn)請咨詢(xún)本公司售后技術(shù)支持或當地的銷(xiāo)售人員（聯(lián)系方式見(jiàn)附錄）。
1.產(chǎn)品介紹
CNBr Focurose 4FF是經(jīng)過(guò)溴化氰活化后含有氰酸酯基團的快流速純化介質(zhì)，適用于偶聯(lián)蛋白質(zhì)、多肽、核酸等含有氨基的生物分子。在生物醫藥純化工藝中經(jīng)過(guò)反復的驗證，得到了廣泛的應用。
特點(diǎn)如下：
a.應用廣泛，可適用于偶聯(lián)含氨基的生物類(lèi)大分子。
b.多點(diǎn)偶聯(lián)，簡(jiǎn)單、靈活、快速、有效，能高效的維持生物分子的生物學(xué)活性及穩定性。
c.流速快、產(chǎn)率高、易于放大。
表1：介質(zhì)性能參數
基質(zhì) | 高度交聯(lián)4%的瓊脂糖 |
粒徑范圍 | 45-165µm |
平均粒徑 | 90µm |
結合載量 | 30mg(Trypsinogen)/ml(介質(zhì)) |
pH穩定性 | 3-11（長(cháng)期） 2-11（短期） |
最大流速 | 700cm/h |
操作壓力 | ≤0.3MPa |
貯存溶液 | 100%丙酮 |
貯存溫度 | 4-8℃ |
2.偶聯(lián)條件
a.（A液）清洗
取適量的沉降膠（0.83g清洗完成后約為1.0ml），用5倍體積的A液將介質(zhì)重懸，5min后將溶液抽干。重復此步驟5次。
備注：此步驟用于激活介質(zhì)，要保證A液的清洗體積要充足、清洗時(shí)間固定在0.5h左右（時(shí)間太久介質(zhì)上面的基團會(huì )水解）。
b.配基溶液的制備
將要偶聯(lián)的生物分子用B液溶解或者將生物分子置換到B液中（生物分子濃度為1-10mg/ml,建議為5mg/ml）。
備注：確保偶聯(lián)時(shí)的pH和鹽濃度與B液一致。
c.偶聯(lián)
將清洗完的介質(zhì)和準備好的樣品按等比例（體積比）混合，室溫條件下溫和混勻3-4h。確定偶聯(lián)成功（通過(guò)測定偶聯(lián)前后生物分子含量確定偶聯(lián)效率）后，將溶液抽干。
備注：偶聯(lián)建議在室溫條件下偶聯(lián)3-4h。對于不穩定的配基，建議4-8℃偶聯(lián)過(guò)夜。
d.（C液）清洗
用5倍體積的C液將偶聯(lián)后的介質(zhì)重懸，再將溶液抽干。再重復此步驟3次。
備注：此步驟用于清洗介質(zhì)中殘留的生物分子，清洗要*。
e.封閉
用5倍體積的C液進(jìn)行重懸，室溫條件下溫和混勻3-4小時(shí)后，將溶液抽干。
備注：此步驟用于封閉介質(zhì)上面的基團，室溫條件下溫和混勻3-4小時(shí)即可。
f.（D液和E液）清洗
用5倍體積的D液將封閉后的介質(zhì)重懸，5min后將溶液抽干；再用5倍體積的E液將介質(zhì)重懸，5min后將溶液抽干。重復此步驟3次。
備注：此步驟用于酸堿清洗掉偶聯(lián)不夠緊密的生物分子。
g.保存
用5倍體積的純化水將介質(zhì)重懸后抽干，再用5倍體積的20%乙醇將介質(zhì)重懸后抽干，最后用20%乙醇浸泡保存。
備注：此步驟用于保存介質(zhì)，避免微生物生長(cháng)。
h.溶液配制
A液：0.001MHCl、0.5M NaCl，調節pH 3.0，4-8℃保存（A液使用前要進(jìn)行預冷處理）。
B液：0.2M NaHCO3、0.5 M NaCl，調節pH 8.3（如果要偶聯(lián)的生物分子為IgG時(shí)，pH=8.5-9.0），室溫保存。
C液：0.1M Tris-HCl，調節pH 8.3，室溫保存。
D液：0.05M Tris-HCl、0.5M NaCl，調節pH 8.5，室溫保存。
E液：O.05M 甘氨酸、0.5MNaCl，調節pH 3.5，室溫保存。
F液：1.0M NaCl，室溫保存。
3.清洗
清洗后可以去除一些強結合性物質(zhì)（例如一些強結合的蛋白、變性蛋白、脂類(lèi)等），從而達到恢復介質(zhì)的優(yōu)良性能（例如載量、流動(dòng)性、柱效等）。
建議每使用5次后進(jìn)行一次清洗，具體清洗頻率需根據純化的初始樣品的潔凈度進(jìn)行調整。
⑴常規清洗
a.用5-10倍柱體積的純化水沖洗。
b.用5-10倍柱體積的D液沖洗。
c.用5-10倍柱體積的E液沖洗。
d.用5-10倍柱體積的F液沖洗。
e.用5-10倍柱體積的純化水沖洗。
f.用5-10倍柱體積的20%乙醇沖洗后保存。
⑵劇烈清洗
a.用2-5倍柱體積0.2%非離子型去污劑沖洗后，立即用5-10倍柱體積純化水沖洗。
b.用2-5倍柱體積6M鹽酸胍沖洗后，立即用5-10倍柱體積純化水沖洗。
c.用5-10倍柱體積的20%乙醇沖洗后保存。
備注：劇烈清洗條件是否適用主要取決于偶聯(lián)的生物分子的穩定性，采用此條件清洗前，建議先做一個(gè)小規模的預實(shí)驗驗證生物分子的穩定性。
4.應用案例
案例一
案例二
5.常見(jiàn)問(wèn)題
表2：常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案
問(wèn)題 | 可能原因 | 解決方案 |
偶聯(lián)效率較低 | 1.B液鹽濃度或pH不對 | 檢測B液配制是否正確 |
2.偶聯(lián)時(shí)間不夠 | 延長(cháng)偶聯(lián)時(shí)間 | |
3.預活化填料不合適 | 嘗試其它種類(lèi)的預活化填料 | |
純化時(shí)目標物不與介質(zhì)結合 或結合量較低 | 1.上樣量過(guò)載 | 降低上樣量 |
2.上樣速度過(guò)快 | 降低上樣流速 | |
3.蛋白或脂類(lèi)在介質(zhì)中聚集 | 及時(shí)有效地清洗介質(zhì) | |
4.樣品在儲存或上樣過(guò)程中失活 | 正確儲存待純化樣品以維持樣品的活性 | |
5.配基和目標物結合比例比較低 | 嘗試加大偶聯(lián)時(shí)配基濃度 | |
6.配基在偶聯(lián)或清洗過(guò)程中降解 | 檢測配基在偶聯(lián)或清洗中的穩定性 | |
洗脫時(shí)沒(méi)有收集到目標物 或只收集到少量目標物 | 1.目標物沒(méi)有與介質(zhì)結合或結合量較少 | 降低上樣流速并檢查介質(zhì)的結合能力 |
2.洗脫條件不合適 | 更改相應洗脫條件或增強洗脫液的洗脫能力 | |
3.目標物在洗脫液條件下出現聚集沉淀 | 檢測目標物在洗脫液條件（鹽濃度和pH等）下的穩定性 | |
目標物純度較低
| 1.樣品沒(méi)有經(jīng)過(guò)前處理 | 樣品上柱前必須要經(jīng)過(guò)離心或過(guò)濾 |
2.樣品粘度過(guò)高 | 用平衡液適當的稀釋樣品，降低粘度。 | |
3.洗雜不* | 加大洗雜體積直至基線(xiàn)平穩并與平衡液一致 | |
4.雜質(zhì)蛋白或脂類(lèi)在介質(zhì)中聚集沉淀 | 及時(shí)有效地清洗介質(zhì) | |
5.洗脫條件不佳，洗脫速度太快、梯度太陡。 | 調整洗脫條件 | |
6.目標物出現降解 | 檢測目標物的穩定性 | |
7.柱料裝填效果不佳 | 重新裝填或購買(mǎi) | |
8.雜質(zhì)出現非特異性吸附 | 適當選擇添加劑降低非特異性吸附 | |
9.分離柱頂部有較大儲樣體積 | 重新裝柱或降低儲樣體積 | |
10.介質(zhì)中有微生物生長(cháng) | 介質(zhì)使用完后，請及時(shí)正確保存介質(zhì) | |
介質(zhì)載量下降 | 1.上樣速度過(guò)快 | 降低上樣流速 |
2.蛋白或脂類(lèi)在介質(zhì)中聚集，導致載量下降。 | 及時(shí)清洗介質(zhì) | |
3.使用次數過(guò)多，配基出現脫落 | 重新偶聯(lián)新的介質(zhì) | |
4.樣品在儲存或上樣過(guò)程中失活，不能較好的與配基結合 | 正確儲存待純化樣品以維持樣品的活性 | |
色譜峰上升緩慢 | 介質(zhì)裝填過(guò)緊 | 重新裝柱 |
色譜峰拖尾 | 介質(zhì)裝填太松 | 重新裝柱 |
柱床有裂縫或干涸 | 出現泄露或大體積氣泡引入 | 檢查管路是否有泄露或氣泡，重新裝柱 |
液流較慢
| 1.蛋白或脂類(lèi)聚集 | 及時(shí)清洗介質(zhì)或濾膜 |
2.蛋白沉淀在介質(zhì)中 | 調整平衡液和洗脫液組分，以維持目標物的穩定性和介質(zhì)的結合效率 | |
3.分離柱中微生物生長(cháng) | 所用試劑必須經(jīng)過(guò)過(guò)濾和脫氣； 樣品上柱前必須離心或過(guò)濾 |
6.訂購信息
表3：訂購信息表
產(chǎn)品 | 規格(ml) | 貨號 |
CNBr Focurose 4FF | 25 | HZ1001-2 |
CNBr Focurose 4FF | 100 | HZ1001-2 |
CNBr Focurose 4FF | 500 | HZ1001-2 |
CNBr Focurose 4FF | 1000 | HZ1001-2 |
備注：大規格包裝產(chǎn)品或其它產(chǎn)品購買(mǎi)，請咨詢(xún)本公司當地銷(xiāo)售或售前技術(shù)支持。
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