記憶缺失性貝類(lèi)毒素

免疫分析法是基于抗體與抗原或半抗原之間的高選擇性反應而建立起來(lái)的一種生物化學(xué)分析法，即根據抗原-抗體反應，采用特異性抗體來(lái)檢測藥物、激素、蛋白質(zhì)、微生物等物質(zhì)的定量分析方法。免疫分析法主要包括酶聯(lián)免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、放射性免疫法、熒光免疫法等，具有方便、快速的特點(diǎn)，但也存在一定的缺點(diǎn)，如費用較高、毒素之間的交叉反應難避免、實(shí)驗結果重現性較差等。

ELISA是檢測海洋生物毒素所采用的主要免疫方法。該技術(shù)可用目測，也可用酶標儀測定光密度值，具有易定性定量的優(yōu)點(diǎn)^[6]。Tsao等^[7]采用單克隆抗體ELISA檢測法檢測ASP中的軟骨藻酸(domoic acid, DA)，并建立了基于單克隆抗體的膠體金免疫條檢測法；該方法的檢測限為5 ng/mL，在10 min內就可完成測定，提示免疫條檢測可用來(lái)快速檢測貝類(lèi)樣品中的DA。也有研究者建立了基于基因工程單鏈抗體競爭ELISA檢測方法，該方法最大的優(yōu)勢是毒素可在大腸桿菌中快速、大量得到表達，且容易和其他小分子融合，形成融合蛋白以用于檢測或其他用途；對該方法進(jìn)行驗證發(fā)現，其與標準高效液相色譜法(high-performance liquid chromatography, HPLC)檢測結果有較好的相關(guān)性^[8]。李軍濤等^[9]建立DSP免疫熒光層析試紙條檢測方法，靈敏度可達0.125 μg/mL，達到我國貝類(lèi)產(chǎn)品中DSP所允許的*。Dubois等^[10]建立了間接競爭ELISA方法檢測STX，該方法用毒素的偶聯(lián)物免疫產(chǎn)生的抗體來(lái)檢測貽貝、牡蠣和扇貝中的STX類(lèi)毒素；在檢測之前，用90%的乙醇溶液將STX類(lèi)毒素從貝類(lèi)組織里快速提取出來(lái)，該方法的*檢測限為5 μg/kg。Garthwaite等^[11]也建立了4類(lèi)貝毒的ELISA方法，均可滿(mǎn)足貝類(lèi)提取物中樣品的鑒定，且樣品回收率較高。TTX為氨基全氫喹唑啉型化合物，是自然界中所發(fā)現的毒性最大的神經(jīng)毒素之一^[12]。Thattiyaphong等^[13]建立了一種側流免疫層析技術(shù)來(lái)實(shí)現TTX的快速檢測，并運用該方法檢測了河鲀及食用魚(yú)中TTX的含量；與液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS)相比，該方法的靈敏度為94.0%，特異性為92.4%?？偟膩?lái)說(shuō)，側流免疫層析技術(shù)可用于大批量樣本的篩選，陽(yáng)性結果的樣本再使用LC-MS/MS進(jìn)行確認，減少了LC-MS/MS的測試量，降低了檢測成本。Reverte等^[14]開(kāi)發(fā)了一種基于雙硫醇自組裝單分子膜的新ELISA方法，該方法可用于檢測河鲀中TTX的含量，檢測限為0.23 mg/kg，其與LC-MS/MS法的相關(guān)性為0.991。

大田軟海綿酸(okadaic acid, OA)是DSP中的主要成分，屬于聚醚類(lèi)海洋生物毒素，尚無(wú)致死病例，但長(cháng)期攝入可以致畸及致癌^[15]。劉仁沿等^[16]通過(guò)細胞融合，制備抗OA單克隆抗體和膠體金標記抗體，建立快速檢測OA的免疫層析試紙條分析方法，該方法檢出限為500 ng/mL。該研究組在此基礎上進(jìn)行改進(jìn)，使用卵清蛋白合成高耦聯(lián)比的包被抗原，以硝酸纖維素膜為載體，改進(jìn)后方法檢測限達12 ng/mL^[17]。張洋等^[18]采用自行研發(fā)的免疫膠體金試紙條對雙貝殼類(lèi)DSP的主要成分OA的污染情況進(jìn)行調查，通過(guò)與ELISA檢測法的結果進(jìn)行比較，發(fā)現該方法檢測結果準確可靠，未出現假陽(yáng)性結果。Johnson等^[19]對4種已經(jīng)商業(yè)化的快速檢測試劑盒是否可檢測英國雙殼貝類(lèi)中的DSP進(jìn)行驗證。這4種試劑盒包括1種ELISA試劑盒、1種蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A，PP2A)試劑盒以及2種側流免疫測定(lateral flow immunoassay, LFI)試劑盒。實(shí)驗結果表明，ELISA與LC-MS/MS具有較好的相關(guān)性，且不存在結果偏大的情況，但是存在假陰性結果；2種LFI試劑盒與LC-MS/MS檢測結果大部分具有一致性，但存在假陰性結果?？偟膩?lái)說(shuō)，選擇何種方法去檢測DSP主要取決于檢測要求、實(shí)驗室的條件、實(shí)驗人員是否經(jīng)過(guò)訓練以及對結果的要求是半定量的還是定性的。