發(fā)布時(shí)間： 2022-09-08 點(diǎn)擊次數： 2953次
黃曲霉毒素總量免疫親和柱測定的基礎是抗原、抗體反應，抗體連接在柱體內，樣品中的黃曲霉毒素經(jīng)過(guò)提取、過(guò)濾、稀釋?zhuān)缓缶徛耐ㄟ^(guò)黃曲霉免疫親和柱，在免疫親和柱內毒素與抗體結合，之后洗滌免疫親和柱除去沒(méi)有被結合的其他無(wú)關(guān)物質(zhì)。用甲醇洗脫黃曲霉毒素，然后注入到分析儀器中用于檢測。
原理：
樣品經(jīng)提取液提取、過(guò)濾、稀釋?zhuān)缓笸ㄟ^(guò)鍵合有黃曲霉毒素總量免疫親和柱。此時(shí)，黃曲霉毒素被親和柱中的抗體特異性的吸附，用水或緩沖液將免疫親和柱上的雜質(zhì)除去，然后用甲醇使抗體變性，從而將黃曲霉毒素從親和柱上洗脫下來(lái)。最后，用HPLC或熒光計進(jìn)行定量檢測。
黃曲霉毒素總量免疫親和柱的操作步驟簡(jiǎn)介：
1、 提取樣品：研磨、稱(chēng)重50g樣品；用甲醇/水（80/20 V/V）混合物將樣品高速混勻1分鐘。
2、 過(guò)濾：將提取的樣品濾膜過(guò)濾，然后再過(guò)0.4μm濾膜。
3、 吸附、淋洗：將濾液2ml加到8ml PBS緩沖液（pH7.2）后，通過(guò)AflaCLEAN凈化柱，流速不大于1mL/min；用10ml水清洗親合柱；用甲醇1ml 兩次將黃曲霉毒素從親合柱上淋洗下來(lái)，并收集于HPLC進(jìn)樣小瓶中。
4、 測定：HPLC直接進(jìn)樣，在經(jīng)過(guò)柱分離后，被UVE衍生化，被熒光檢測器記錄各種黃曲霉毒素的濃度。
注意事項：
1、黃曲霉毒素對人體有害，應戴手套操作；
2、使用過(guò)的玻璃容器及黃曲霉毒素溶液用5%濃度的NaClO溶液浸泡過(guò)夜；
3、不要使用過(guò)了有效日期的免疫親和柱；
4、免疫親和柱不使用時(shí)要2-8℃保存，不可凍存；
5、使用前，免疫親和柱需回至室溫（22-25℃）；
6、取樣量：根據實(shí)際情況可以適當增減，但不可太少，同時(shí)提取液體積要按比例隨之改變；
7、pH：上柱液pH要在6~8之間，若偏離此范圍需要HCl或NaOH調節pH。
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